Ремонт

Микологическое обследование: особенности метода, назначение и процедура. Научно-исследовательская лаборатория микологического мониторинга и биологии грибов (референс-лаборатория)

Диагностика микозов занимает отдельное место среди диагностических процедур. Выявить тот или иной грибок, вызывающий инфекцию, бывает довольно трудно. Лечение грибковых инфекций также является непростым процессом, требующим немалых усилий и времени. За микологическим обследованием чаще обращаются к дерматологу или гинекологу, а также врачу-микологу.

Микологическое исследование – что это, назначение на анализ

Мы чаще привыкли сталкиваться с бактериями и вирусами, а вот грибковые инфекции можем упустить (за исключением таких распространенных грибковых поражений, как, например, перхоть или молочница). Лечение грибковой инфекции может занять некоторое время.

Очень часто грибок затрагивает внешность человека – ногти, волосы, кожу головы, лица и тела, а также внутренние органы, слизистые оболочки, поэтому лечение необходимо начать как можно раньше.

При обследовании берется материл (пораженный грибком), в лаборатории он тщательно осматривается в микроскоп, проводят различные реакции с помощью реагентов, позволяющих выявить возбудителя, а также посев на грибки, когда в питательной среде выращивают грибок, чтобы точнее определить его вид.

Грибок может распространяться не только там, где сыро и тепло, но и практически на любой поверхности: кожа, ушные раковины, слизистые оболочки, волосяной покров, ногти, горло т.д.

Микологическое обследование проводится при явных признаках грибковой инфекции:

Покраснение и зуд. Раздражение возникает при любой грибковой инфекции: молочнице, грибке кожи, горла и т.д. В месте поражения ощущается жжение, зуд, появляется краснота. Зуд часто бывает очень сильным, нестерпимым, что значительно ухудшает качество жизни больного.
Выпадение волос. Если грибок поражает волосяной покров или же кожу головы, начинается процесс травмирования волосяных луковиц и выпадения волос. Таким симптомом обладают лишаи. Сильный грибок может привести к алопеции.
Шелушение кожи. Кожа, пораженная грибком, начинает сильно шелушиться. Верхний слой эпидермиса отмирает, что доставляет немало психологических проблем. Остановить такое шелушение исключительно кремами трудно и в некоторых случаях опасно, поскольку лечить нужно источник проблемы.
Белый налет. Белый налет на миндалинах и горле, слизистой носоглотки, а также белые чаще всего указывают именно на грибковую инфекцию.

Подготовка и процедура

Никакой подготовки к микологическому обследованию чаще всего не требуется, поскольку берется или с пораженного участка.

В первую очередь врач осматривает пациента на внешние признаки грибковой инфекции, собирает анамнез, а уже затем назначает дальнейшее обследование.

Грибки бывают разные, все они требуют различных методов исследования. Так, например, грибок под названием Кандида определяется легко – по мазку из влагалища или соскобу материала. Достаточно обычного лабораторного обследования под микроскопом, чтобы узнать эти овальные грибки.

Любое исследование грибков и сбор материала должны проводиться с соблюдением всех правил техники безопасности.

Грибок быстро распространяется, в том числе по воздуху, поэтому материал собирают в перчатках специальными инструментами и хранят только в закрытых контейнерах.

Выделяют несколько процедур по исследованию грибковой инфекции:

Осмотр под микроскопом. Это процесс может сопровождаться применением различных реагентов или же проводится без них. Небольшое количество исследуемого материала наносится на стекло и тщательно осматривается в микроскоп.
Свечение люминесцентной лампой. Такое обследование проводят только на открытых участках кожи. При помощи лампы определяются пораженные участки. Они начинают светиться синеватым светом. Однако определить разновидность и чувствительность грибка таким образом невозможно.
Посев на грибки. Более длительный, но очень информативный метод исследования. Небольшое количество пораженного грибком материала помещают в специальную питательную среду, где грибки произрастают и через некоторое время с легкостью определяются.
. Полимеразная цепная реакция позволяет восстановить структуру ДНК грибка, выявить его разновидность, определить количество грибков и их чувствительность к препаратам.

Существуют и системные, более тяжелые грибковые поражения, которые выявляются с помощью , и .

Результаты исследования и дальнейшие действия

Микологическое обследование проводится врачом-микологом. Это трудоемкий процесс. От правильной постановки диагноза зависит эффективность лечения. Неправильное лечение и его отсутствие может привести к очень серьезным последствиям.

Результаты микологического обследования, как правило, однозначны: присутствие или же отсутствие того или иного грибка:

В случае с грибком Кандида выявляются в крови. В этом случае отрицательный результат может указывать как на отсутствие грибка, так и на отсутствие реакции иммунной системы на него, а положительный результат – на присутствие грибка, носительство, кандидоз, вагинит и т.д.
Трихомикозы определяются только с помощью микроскопа и грибкового посева. Эти грибки поражают в основном кожу и волосы, поэтому материал берется методом соскоба. Результат либо положительный, либо отрицательный. При положительном результате назначают лечение либо местное, либо общее. Если пораженный участок кожи невелик, достаточно местного лечения.
Диагностика бластомикоза Гилкриста более сложна. Необходимо не только провести микроскопическое обследование пораженного участка, но и выявить наличие антител в крови. В данном случае учитываются суммарные результаты .

Больше информации о грибковых заболеваниях можно узнать из видео:

После обследования врач назначает лечение. Стоит помнить, что грибок далеко не безобиден. Он может не только приносить вред внешности человека, но и затрагивать внутренние органы, ухудшая общее состояние организма.

Лечение грибковой инфекции часто более трудоемкое и длительное, чем лечение бактериальной инфекции.

Это связано с тем, что бактерия сразу распознается, как враждебная единица, а вот грибки часто очень схожи с клеткой человека, и они быстро адаптируются, вырабатывая иммунитет к препаратам.

По этой причине пропивать все курсы приписанных препаратов нужно до конца, не прекращая лечение без разрешения врача. Также нельзя просто так пить противогрибковые препараты без . Они обладают рядом побочных эффектов и при неправильном приеме только повышают устойчивость грибков.

История

С момента создания НИО глубоких микозов в его состав входила микологическая лаборатория, сотрудники которой занимались изучением биологических особенностей патогенных грибов. В 1988 году была организована лаборатория морфологии, объединившая специалистов- микологов и патоморфологов с целью комплексного исследования тканевых и культуральных форм возбудителей микозов. В 1998 лаборатория была преобразована в НИЛ морфологии и биологии грибов, руководителем которой была назначена к.б.н. Н. В. Васильева. Приказом ректора ГОУ ДПО СПб МАПО № 110 от 20.06.2005 г. на базе НИЛ морфологии и биологии грибов была создана Научно-исследовательская лаборатория микологического мониторинга и биологии грибов (референс-лаборатория). Среди сотрудников, работавших в НИЛ в предшествующий период, были известные специалисты - микологи, как проф. В. Б. Антонов, к.б.н. Г. И. Горшкова, к.м.н. М. А. Михайлова и др.

1 ряд (слева направо): н.с. Маметьева А.А., проф. Елинов Н.П., проф. Васильева Н.В., зав. НИЛ Богомолова Т.С., н.с. Павлова И.Э., 2 ряд (слева направо): зав. РКПГ Чилина Г.А., врач-лабораторный миколог Босак И.А., н.с. Выборнова И.В., н.с. Доршакова Е.В.

Задачи научных исследований биологической лаборатории грибов:

1. Изучение экологии грибковых патогенов и условных патогенов в различных географических регионах. 2 .Создание референтных штаммов микромицетов - патогенов и условных патогенов -чувствительных и резистентных в антимикотикам. 3. Изучение микобиоты в жилых помещениях, в медицинских и других учрежденияхс определением её морфолого - физиологических особенностей. 4. Токсигенные грибы и микотоксикозы - возбудители, индуцируемые ими патологические процессы у пациентов. Характеристика микотоксинов и оценка их вкладов в патогенез разных микозов у людей и животных. 5 . Мониторинг грибов в процессах биоразрушения различных объектов, и определения их доли и роли в ассоциациях с другими организмами. Подбор соответствующих биоцидов и рекомендации по их использованию на практике. 6 . Штрих - кодирование избранных тест - культур с использованием ДНК микромицетов и последующим её секвенированием (совместная работа с НИЛ молекулярно -генетической микологии).

В референс-лаборатории микологического мониторинга и биологии грибов выделено несколько направлений работы

Изучение морфолого-биологических свойств микроскопических грибов (микромицетов) - возбудителей заболеваний у человека Основные научные исследования направлены на изучение штаммовых различий грибов - возбудителей заболеваний у человека по морфологическим и биологическим свойствам, в том числе и признакам патогенности. В настоящее время в качестве возбудителей микозов у человека известно около 500 видов микромицетов. Ежегодно появляются новые патогены, меняется этиологическая структура инвазивных и поверхностных микозов, что создаёт трудности в их диагностике и лечении. С 2010 года в лаборатории проводят видовую идентификацию культур грибов не только традиционными методами (по морфологическим и физиологическим свойствам), но и методом ДНК - секвенирования в тесном контакте с НИЛ молекулярно - генетической микологии.

В лаборатории начаты уникальные исследования токсигенности грибов - возбудителей микотоксикозов.

- «Факторы патогенности Cryptococcus neoformans и их роль в патогенезе криптококкоза» (директор НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Васильева Н.В.; научный консультант д.б.н., проф. Елинов Н.П.)

- «Сравнительная характеристика природных и клинических изолятов Cryptococcus neoformans » (аспирант Босак И.А.; научный руководитель д.б.н., проф. Васильева Н.В.). Криптококкоз чаще развивается у ВИЧ-инфицированных больных (75%), характеризуется хроническим течение и высокой частотой резистентности (66%) возбудителя к вориконазолу invitro. Установлены природные резервуары этого возбудителя в Санкт-Петербурге - отложения голубиного помёта на чердаках жилых домов. Исследованы факторы патогенности и вирулентность изолятов, выделенных от больных и из голубиного помёта. Установлено, что штаммы C. neoformans варьируют по вирулентности, биологическим свойствам и генотипу. Исследование соответствует международному уровню состояния проблемы.

- «Клинико-лабораторные варианты хронического аспергиллёза лёгких» (аспирант Борзова Ю.В.; научные руководители д.б.н., проф. Васильева Н.В., д.м.н., проф. Климко Н.Н.). Изучена этиология, определены факторы риска развития хронического инвазивного аспергиллёза легких. Оценены клинические и лабораторные характеристики заболевания и диагностическая значимость серологического метода выявления галактоманнана в сыворотке крови; выявлена низкая диагностическая ценность общепринятых микологических обследований у больных хроническим и острым инвазивным аспергиллезом легких. Определено, что возбудители инвазивного аспергиллёза легких чувствительны in vitro к вориконазолу, итраконазолу и позаконазолу.

- «Особенности диагностики и лечения онихомикоза при псориазе» (врач КДО Свиридова К.В.; научные руководители: д.м.н., проф. Корнишева В.Г., д.б.н., проф. Васильева Н.В.).

Мониторинг чувствительностимикроскопических грибов к антимикотикам

Мониторинг чувствительности и резистентности микромицетов к антимикотикам и дезинфектантам - важнейшее направление деятельности лаборатории. В лаборатории впервые проведено проспективное исследование чувствительности дрожжевых организмов - возбудителей инвазивных и поверхностных микозов, выделенных от больных в Санкт - Петербурге, к наиболее распространённым антимикотикам, применяемым для лечения: флуконазолу и вориконазолу. Работа была частью Международного многоцентрового исследования ARTEMISDisk.

В рамках Международного научного исследования SCAREStudy начато изучение резистентности возбудителей аспергиллёза к азолам: итраконазолу, вориконазолу, позаконазолу. Изучено 38 изолятов Aspergillus spp. Выявлено 3 штамма, резистентных к азолам.

Диссертационные исследования, проводимые с участием сотрудников лаборатории по темам:

- «Мониторинг чувствительности дрожжей, выделенных от пациентов в Санкт- Петербурге» (научный сотрудник НИЛ микологического мониторинга и биологии грибов Выборнова И.В.; научный руководитель д.б.н., проф. Васильева Н.В.) За 5 лет изучено более 2000 штаммов возбудителя. Отмечено возрастание частоты микозов, обусловленных не-albicans видамиCandida , в том числе C. guilliermondii. Показано снижение доли чувствительныхк флуконазолу штаммов среди возбудителей кандидоза.

Изучение микромицетов - контаминантов и биодеструкторовпомещений

Микроскопические грибы, присутствующие в воздухе больничных помещений, в воздухе сырых жилых помещений и развивающиеся в строительных материалах и конструкциях производственных (в том числе медицинских) и жилых зданий, обуславливают профессиональные и бытовые микозы, а также нозокомиальные микозы и микоаллергозы. Это аспергиллез бронхов и лёгких, микогенная аллергия, аллергический бронхолёгочный аспергиллёз, экзогенный альвеолит, мукороз, пенициллиоз и др. микозы органов дыхания, индуцируемые микромицетами. Сотрудники лаборатории осуществляют микологический мониторинг больничных, жилых, служебных и производственных помещений, разрабатывают меры борьбы с биодеструкцией зданий, обусловленной микроскопическими грибами. При обследовании помещений с нарушенным температурно - влажностным режимом (подвергшихся протечкам, затоплению после пожара, с отсутствием гидроизоляции и т.п.) специалисты лаборатории выявляют очаги биоповреждений, отбирают пробы воздуха, соскобы и смывы с поражённых поверхностей. По результатам микологического исследования образцов выдаётся заключение о количестве обнаруженных микроскопических грибов, их видах и потенциальной опасности для здоровья.

Диссертационные исследования, проводимые с участием сотрудников лаборатории по темам:

- «Микромицеты - контаминанты больничных помещений» (аспирант Суханова Ю.А.; научный руководитель д.б.н., проф. Васильева Н.В.). Получены новые данные о распространённости и источниках условно - патогенных грибов в больничных зданиях, выявлен широкий спектр грибов - контаминантов воздуха - причинных факторов внутрибольничных микозов, микоаллергозов и микотоксикозов.

- «Микогенная аллергия у жителей помещений, поражённых микромицетами»

(ассистент кафедры клинической микологии, аллергологии и иммунологии Козлова Я.И.; научные руководители: д.б.н., проф. Васильева Н.В., д.м.н., проф. Н.Н. Климко).

Установлено, что факторами развития микогенной аллергии являются признаки плесневого поражения и определённая концентрация спор микромицетов в воздухе. Предложено предельное значение концентрации грибных спор в воздухе для своевременного принятия мер по эрадикации грибов и снижения заболеваемости, связанной с присутствием плесени.

- «Микроорганизмы - биодеструкторы больничных зданий» (научный сотрудник НИЛ микологического мониторинга и биологии грибов Павлова И.Э.; научный руководитель д.б.н., проф. Васильева Н.В.). Выявлены основные причины биодеструкции возводимых и эксплуатируемых больничных зданий, в частности применении негрибостойких строительных материалов.

Достижения

Cryptococcus

neoformans.

Изучена противогрибковая активность основных строительных биоцидов и дезинфектантов. Показана негрибостойкость некоторых строительных материалов.

На базе НИЛ выполнены и защищены 4 диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук и 1 диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. За 2006-2010 г.г. опубликовано 127 печатных работ, сделано 57 докладов на Российских и международных научных конференциях.

Учебно-методическая работа

Сотрудники лаборатории принимают участие в повышении квалификации слушателей кафедры микробиологии и микологии, оказывают консультативную помощь.

Диагностическая работа

Лаборатория в качестве референтной, оказывает консультативно - диагностическую помощь ЛПУ города и России по вопросам диагностики микозов и идентификации возбудителей, используя методики международного уровня и в соответствии с международными стандартами.

Зав. лабораторией к.б.н. Т.С. Богомолова проводит микроскопические и культуральные исследования патологического материала на грибы. Микроскопические исследования осуществляются с помощью световой и люминесцентной микроскопии.

Проводятся исследования чувствительности к антимикотикаммикроскопических грибов - возбудителей заболеваний.

Лаборатория выполняет договорные исследования по следующим направлениям:

Микологические исследования помещений различного назначения. По результатам микологического исследования образцов выдаётся заключение о количестве обнаруженных микроскопических грибов, их видах и потенциальной опасности для здоровья. Эта работа проводится как в рамках по научно - исследовательской тематики, так и по Испытательному лабораторному центру.
Исследование грибостойкости материалов, в том числе строительных.
Определение противогрибковой активности лекарственных средств, новых химических субстанций, парфюмерно-косметических изделий, дезинфектантов.
Определение чувствительности определённых грибов к лекарственным препаратам, новым субстанциям, дезинфектантам.
Испытание новых приборов (устройств) для противогрибковой обработки.

Публикации

Васильева Н.В., Разнатовский К.И., Котрехова Л.П., Богомолова Т.С., Пупкова М.А., Пинегина О.Н., Чилина Г.А., Босак И.А., Кубасова Н.А., Белоусова Ж.А., Кулешова Л.В., Жуковский Р.О., Грязева Т.М., Владимирова И.С., Цветкова М.Г., Монашкова М.Л., Холонай Н.Н., Стойко А.А., Клюева Т.А., Сажина В.В. Этиология онихомикоза стоп в г. Санкт-Петербурге и г. Москве. Результаты проспективного открытого многоцентрового исследования. // Проблемы медицинской микологии. - 2009. - Т.11, № 2. - с.14-18. Выборнова И.В., Васильева Н.В., Босак И.А. Мониторинг чувствительности возбудителей кандидоза к флуконазолу //Проблемы медицинской микологии. - 2010. - Т.12, № 2. - c.73. Козлова Я.И., Н.В.Васильева, Г.А.Чилина, Т.С.Богомолова, О.В.Аак, Н.Н.Климко. Микогенная аллергия у жителей помещений, пораженных микромицетами //Проблемы медицинской микологии. - 2008. - Т.10, № 2. - с.17-21. Корнишева В.Г., Васильева Н.В., Богомолова Т.С., Гудкова Ю.И. Диссеминированный кожно-лимфатический споротриксоз у больной с хроническим идиопатическим миелофиброзом // Проблемы медицинской микологии. -2009. - Т.11, № 2. - с.19-23. Павлова И.Э. Биоповреждения в больничных зданиях //Проблемы медицинской микологии. - 2008. - Т.10, № 1. - с.35-39. Цинзерлинг В.А., Аравийский Р.А., Васильева М.В., Фомин Ю.А., Додонов К.Н. Наблюдение аспергиллёзного сепсиса при ВИЧ-инфекции в стадии СПИД // Проблемы медицинской микологии. - 2008. -Т.10, № 4. - с.6-8.

Организация микологической лаборатории

1.1. Устройство и противоэпидемический режим

Согласно инструкции СП 1.2.036-95 Госкомэпиднадзора РФ, Москва, 1996 г. "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности” по эпидемиологической опасности дрожжевые и плесневые грибы, а также дерматофиты относятся к III-IV группам возбудителей инфекционных болезней, а грибы-возбудители гистоплазмоза, бластомикоза и кокцидиоидоза - ко II группе патогенности. Поэтому при работе с ними необходимо соблюдать особые правила техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены, направленные на обеспечение личной и общественной профилактики заражения, аллергизации и распространения инфекции. Работа с культурами грибов II группы может производиться только на основании разрешения, выданного санэпидстанцией, с соблюдением инструкций по технике безопасности.

Лаборатория для работы с микроорганизмами III-IV групп должна иметь определенный набор помещений, включая комнату (или специально оборудованное место) для приема и регистрации материала, бокс-посевную для посева и работы с культурами, комнату для варки сред, комнату с автоклавами для стерилизации и уничтожения патологического материала и культур, моечную, препараторскую, кладовую, гардероб для одежды сотрудников, туалет. Лаборатория укомплектовывается легко дезинфицирующейся мебелью, включая шкафы для чистой лабораторной посуды, реактивов, питательных сред, соответствующим оборудованием и инструментами. Для работы необходимы спиртовки или газовые горелки, микробиологические петли, микологические лопаточки, шпатели, эпиляционные и анатомические пинцеты, кусачки маникюрные, скальпели, ножницы, ложечки Фолькмана, пипетки разные, пастеровские пипетки, иглы препаровальные, стеклянные палочки, шприцы, низкоскоростная центрифуга, аппарат для встряхивания, чашки Петри, пробирки, стеклянная посуда, ультрафиолетовая лампа Вуда с фильтром, микроскопы, осветители, термостаты, автоклавы, холодильники, сухожаровые шкафы, бактерицидные лампы.

Воздух в лаборатории (боксе) обеззараживается ультрафиолетовыми облучателями. Их включают на 1 - 1,5 ч и входят в помещение через 20 мин после выключения. Пол и рабочие столы в помещениях, где производится работа с патологическим материалом, ежедневно убирают влажным способом с применением дезинфицирующих средств (5% раствор хлорамина, 5% осветленная хлорная известь). Термостаты еженедельно протирают 0,5% раствором хлорамина, стены обрабатывают дезсредствами 1 раз в месяц. Стерилизацию посуды и инструментов горячим воздухом в сухожаровых шкафах производят при 180 С в течение 60 мин (контроль - виннокаменная кислота).

1.2. Взятие и доставка патологического материала

Необходимо помнить, что любой изучаемый в лаборатории материал потенциально опасен. Взятие патологического материала следует производить в асептических условиях, в халатах и марлевых масках. Одежду больного при взятии материала защищают клеенчатой пелериной и салфеткой. Взятие материала с ног производят на специальной скамейке, покрытой клеенкой. Пелерины, салфетки после каждого использования обеззараживают кипячением в течение 15 мин или погружением в дезраствор (5% раствор хлорамина на 3 ч или 5% осветленную хлорную известь -на 2 ч). Патологический материал или культуры переносят в специальной таре (металлические или пластмассовые ящики с крышками, биксы), которую внутри и снаружи ежедневно обрабатывают дезрастворами.

1.3. Работа с патологическим материалом

Все посевы производятся вблизи огня спиртовки или газовой горелки с обжиганием инструмента и краев пробирки. Засеянные пробирки и другие емкости должны иметь четкие надписи с указанием даты посева, номера анализа или вида и штамма возбудителя.

Загрязненные пипетки, шпатели, предметные и покровные стекла обеззараживают погружением в 5% раствор фенола, 5% раствор лизола на 30 мин или в 5% раствор хлорамина или 5% раствор осветленной хлорной извести на 2-3 ч, затем моют и кипятят. Случайно разбитые емкости, содержащие патологический материал, заливают одним из вышеупомянутых дезрастворов на 2-3 ч с последующей влажной уборкой помещения с применением дезсредств. Патологический материал (кусочки тканей, кожные и ногтевые чешуйки) и отработанные культуры грибов автоклавируют при 2 атм. /132 С/ 20 мин (контроль - мочевина), при 1,5 атм. /126 С/-30 мин (контроль - бензойная кислота), либо кипятят 1 час в воде или 30 мин в 1% мыльно-содовом растворе. Жидкий патологический материал (кровь, мочу, мокроту, промывные воды и т.д.) и фекалии, смешанные в соотношении 1:1 с водой, засыпают хлорамином или хлорной известью 200 г/л на 2 ч с последующей эвакуацией в канализацию.

Особенности получения патологического материала в зависимости от локализации микоза

Грибы способны поражать различные органы человека. Это определяет разнообразие патологического материала, который необходимо исследовать при подозрении на микоз. Обязательным условием успешного исследования является взятие материала из очагов поражения в асептических условиях.

Мокроту - утреннюю порцию, выделенную при откашливании, собирают в стерильную банку со стеклянными бусами, желательно с завинчивающейся крышкой. Перед этим больному необходимо тщательно почистить зубы и три раза прополоскать ротовую полость и зев одним из растворов: 2% питьевая сода, 2% бура, марганцево-кислый калий слегка розового цвета.

Промывную жидкость бронхов, гайморовых полостей, плевральную жидкость, желудочный и дуоденальный сок, желчь, цереброспинальную жидкость собирают в стерильные пробирки.

Мочу собирают после тщательного туалета наружных половых органов в середине или в конце мочеиспускания в количестве 10 - 15 мл в стерильные банки. У женщин моча собирается катетером.

Фекалии (последняя порция) собирают в баночку.

Гной из закрытых полостей (абсцессы) берут с помощью пунктирования и аспирации в стерильные пробирки.

Отделяемое свищей (гнойное и серозное) в случае обильного выделения можно собирать в стерильные пробирки. При незначительном количестве отделяемого материал собирают тампоном, пастеровской пипеткой или бактериологической петлей.

Отделяемое слизистых ротовой полости, миндалин, влагалища, цервикального канала, уретры, носа, конъюнктивы глаз для посева берут тампоном из гигроскопической ваты, который помещают в стерильную пробирку или в пробирку с 2 мл жидкой питательной среды (сусло, Сабуро, МПБ). Материал со слизистых оболочек рта и зева берут вначале с внутренней поверхности щек, неба, губ, затем с языка, тщательно протирая тампоном спинку и корень, а в заключение - круговым движением из зева. Для микроскопии соскобы беловато-сероватых налетов слизистых берут ложечкой Фолькмана, предметным стеклом.

Кровь берут из локтевой вены в количестве 5-10 мл после тщательной дезинфекции кожи в области локтевого сгиба.

Кусочки органов и биопсированную ткань собирают в две стерильные чашки Петри или баночки с завинчивающейся крышкой. Одну пробу заливают 10% раствором формалина (40% формальдегид - 1:10) для гистологического исследования, вторую используют для микологического исследования.

Ногтевые чешуйки соскабливают скальпелем из глубоких слоев пораженной ногтевой пластинки, собирают в стерильную чашку Петри или помещают между двух стерильных предметных стекол, которые фиксируют резинкой и помещают в бумажный пакетик. При паронихиях кожные чешуйки собирают скальпелем с поверхности края околоногтевого валика, а капли гноя берут из-под валика бактериологической петлей или пастеровской пипеткой.

Кожные чешуйки с мест поражения соскабливают скальпелем, берут на исследование покрышки пузырьков и пустул. При поражениях наружного слухового прохода кожные чешуйки берут петлей или тампоном. Тампон помещают в сухую пробирку.

Патологический материал транспортируют в специальной таре или металлических биксах, защищая от прямых солнечных лучей. Поступивший в лабораторию материал исследуют в течение часа после взятия при хранении в условиях комнатной температуры или не более чем через 3 ч при хранении в холодильнике при температуре +4 С. Исключение составляет цереброспинальная жидкость, которую хранят в термостате при +37 С в течение того же времени. Ногтевые и кожные чешуйки при необходимости можно исследовать в более поздние сроки.

В сопроводительном документе указывают фамилию, имя, отчество, пол, возраст и адрес больного, предполагаемый клинический диагноз, наименование исследуемого материала, время его взятия, локализацию очага, номер истории болезни, фамилию врача и учреждение, направляющее материал.

Работа с живыми патогенными грибами и актиномицетами в лаборатории требует большой четкости и осторожности.

Микологические лаборатории должны иметь изолированное помещение.

Работу следует проводить в чистых боксах.

Все манипуляции с культурами мицелиальной фазы, а также изучение мицелиальной фазы, а также изучение выживаемости патогенных грибов и актиномицетов во всех фазах проводят в герметическом боксе, с фильтрационной системой, включающей фильтрацию воздуха, поступающего в бокс и выходящего из него через фильтры.

Работу в боксе проводят в костюме III типа с ватно – марлевой системой.

До начала работы, но не позже чем за 15 минут, в боксе включают бактерицидные лампы и вакуум – насос. Если во время работы в боксе прекращается отсос воздуха, работу немедленно прекращают.

По завершении работы предметы, находящиеся в боксе, а также внутренние стены бокса, обрабатывают одним из дезинфицирующих раствором путем орошения до сплошного смачивания всей поверхности. После этого включают на 15 – 20 минут бактерицидную лампу и только после этого бокс разгружают.

После разгрузки бокс облучают бактерицидной лампой еще раз в течение 30 минут при работающей фильтро – вентиляционной системе.

По окончании работы в боксе, сотрудники моют руки в перчатках в дезинфицирующем растворе, выходят в преддушевую, где снимают халат, косынку, маску. Помещают их в соответствующие биксы для автоклавирования или в растворы для последующей дезинфекции или кипячения и проходят санобработку в душе.

Посевы в металлических емкостях помещают в термостаты, а материал для обеззараживания погружают в проверенные на целостность металлические бачки с крышками.

Посевы мицелиальных культур в боксах делают после предварительного внесения в пробирки или матрацы физиологического раствора или бульона.

При работе с мицелиальными фазами грибов или актиномицетов, во избежание заражения аэрогенным путем, агаровые чашки Петри с посевами выдерживают в термостате не более пяти суток (до начала спороношения).

Просмотр посевов с мицелиальными фазами грибов актиномицетов проводят в обычной боксовой комнате в костюме III типа с маской.

Работу с дрожжевыми фазами грибов проводят в обычной боксовой комнате в костюме III типа с маской.

Серологические исследования проводят в костюме IV типа с ватно – марлевой повязкой.

При проведении серологических исследований в микологической лаборатории обязательно предварительное обеззараживание исследуемого материала путем автоклавирования или добавления 0,5 – 1,0% формалина С последующим выдерживанием не менее двух суток при 37 градусах и проверкой на стерильность.

Исследуемые сыворотки перед постановкой серологических реакций прогревают при 56 градусах 30 минут, затем добавляют мертиолат (1: 10000) и исследуют после этого не ранее чем через 24 часа.

С целью получения антигенов, вакцин и проведения других работ, выращенную при определенных условиях грибницу обеззараживают автоклавированием при 0,5 ат в течение 30 минут дважды, если работают с кокцидиозным грибом и один раз, если работают с возбудителями гистоплазмоза и бластомикоза.

Дрожжевые фазы возбудителей гистоплазмоза и бластомикозов, мицелиальные фазы кокцидиозного гриба, возбудителей гистоплазмоза и бластомикозов можно обеззараживать добавлением 0,5% формалина.

Для проверки грибной массы или фильтратов на стерильность делают посев их по 0,5 мл в пробирки с сахарным мясо – пептонным агаром и бульоном, плотной и жидкой среды Сабуро.

Посевы выдерживают в течение 10 суток при 28 и 37 градусах. До получения результатов контрольного посева, взвеси и фильтраты хранят при 4 градусах.

Остатки патологического материала, неиспользованные культуры грибов, актиномицетов, загрязненные этими микробами посуда и пипетки обязательно автоклавируют.

Отработанные препараты погружают в 10% раствор хлорамина и тщательно промывают после кипячения. Посуду с живыми культурами дезинфицируют 5% фенолом или 10% хлорамином в течение одного часа с последующей влажной уборкой помещений дезинфицирующими средствами и УФ- облучением стен и воздуха помещений в течение 1 – 1,5 часа.

Загрязненные живыми грибами или актиномицетами руки моют с мылом, протирают спиртом и тщательно споласкивают водой.

При травматическом повреждении кожи, порезах, попадании загрязненного материала на слизистую глаза немедленно проводят лечебно – профилактическое мероприятие.

Работу, связанную с заражением животных и их исследованием, а также с другим заразным материалом, проводят в блоке для инфицированных животных, в котором предусматривается помещение для настольного бокса и санпропускник.

При работе с животными используются костюмы I – II типа с ватно – марлевой маской.

Заражение животных возбудителями глубоких микозов в мицелиальной фазе, а также вскрытие этих животных проводят во вскрывочной, интраназальное заражение – в настольном боксе с фильтро – вентиляционной системой.

Перед заражением животных и после него место введения материала обрабатывают 1% настойкой йода.

Исследование проб почвы, гнезд грызунов, помета птиц и пр. проводят в боксе с фильтро – вентиляционной системой.

По окончании работы с зараженными животными и другим материалом, руки в перчатках моют в одном из дезинфицирующих растворов. Защитную одежду снимают в преддушевой и обеззараживают.

После этого сотрудники проходят санобработку.

Трупы павших или забитых животных обеззараживают автоклавированием, кипячением, сжиганием или помещают в баки с дезинфицирующим раствором на одни сутки.

Посуду, применяемую при работе с членистоногими, дезинфицируют кипячением. Отходы заливают дезинфицирующими растворами или сжигают, инструменты кипятят или обжигают в огне.